氨基酸的檢驗結果為什么有很大差別
復方氨基酸注射液的生產,主要存在二個問題,
一是澄明度,影響澄明度的關鍵是原料純度,一般均需反復精制。
其次是穩定性,主要表現為含量下降色澤變深,其中以變色最為明顯。
影響穩定性的因素有 氧氣、光、溫度、金屬離子、pH等,故輸液要通氮氣,調節pH,加入抗氧劑等措施,并避免金屬離子混入,避光保存。
一個配制批次,滅菌后的同一柜次,三個地方測出三種含量,主要成份是色氨酸最明顯也就是說含量不均,上下差10幾個標示量,偏高的現象還是多。
就色氨酸含量不均說一下我的看法:
1.活性炭的加入量必須精確。
2.加入活性炭后的攪拌時間必須保證30分鐘以上,保證有足夠的吸咐時間。
3.經常檢查配制罐的充入氮氣狀態,有些氨基酸成份遇氧氣分解氧化。
有些是秘密了不便全說,我想上述保證了問題就解決了
如何處理葡萄酒中氨基酸的檢測結果
氨基酸檢測最早是用氨基酸分析儀,不過早過時了,現在用HPLC的比較多,采用HPLC柱后衍生的方法,不過弊端太多,做初步的檢測還可以,但做科研課題就不行了。最好的方法是用質譜技術。多達42種氨基酸的含量測定,采用質譜技術并使用44種氨基酸同位素對內標,精確度和重復性都有很好的保證,和傳統的毛細管電泳法、HPLC法、氨基酸分析儀比較,無論是從精度上、還是檢測的范圍上和檢測結果的準確度上都有了很大的提高和改善。
紙層析法分析氨基酸結果
氨基酸的分離鑒定——紙層析法
一,實驗目的
掌握氨基酸紙層析的方法和原理,學會分析待
測樣品的氨基酸成分.
二,實驗原理
紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析.濾紙纖維上的羥基具有親水性,吸附一層水作為固定相,有機溶劑為流動相.當有機相流經固定相時,物質在兩相間不斷分配而得到分離.
溶質在濾紙上的移動速度用Rf值表示:
Rf=原點到層析斑點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離
在一定的條件下某種物質的Rf值是常數.Rf值的大小與物質的結構,性質,溶劑系統,層析濾紙的質量和層析溫度等因素有關.本實驗利用紙層析法分離氨基酸.
三,實驗器材
(1)大燒杯(5000mL):1只/組
(2)微量注射器(100
L):1只/
組.
(3)噴霧器:公用.
(4)培養皿:1只/組.
(5)層析濾紙(長22cm,寬14cm的新華一號濾紙):1張/組.
(6)直尺,鉛筆:自備.
(7)電吹風:1只/組.
(8)托盤,針,白線:1套/組.
(9)手套:1雙/組.
(10)塑料薄膜:公用.
(11)小燒杯:50mL,1只/組.
四,實驗試劑
(1)擴展劑:將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中,與5體積水混合,充分振蕩,靜置后分層,棄去下層水層.
(2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%的待測氨基酸液1種.
(3)顯色劑:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液.
實驗試劑
五,實驗操作
檢查培養皿是否干燥,潔凈;若否,將其洗凈并置于干燥箱內120℃烘干.
(1)平衡:剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上,將層析缸或大燒杯到置于塑料薄膜上,再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置于倒置的層析缸或大燒杯中,用塑料薄膜密封起來,平衡20min.
(2)規劃:帶上手套,取寬約14cm,高約22cm的層析濾紙一張.在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行于底邊的直線A,在直線上做4個記號,記號之間間隔2cm,這就是原點的位置.另在距左邊緣1cm處畫一條平行于左邊緣的直線B,在B線上以A,B兩線的交點為原點標明刻度(以厘米為單位),參見左圖.
(3)點樣:用微量注射器分別取10mL左右的氨基酸樣品(每取一個樣之前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,以免交叉污染),點在這四個位置上.擠一滴點一次,同一位置上需點2~3次,2~3mL/次,每點完一點,立刻用電吹風熱風吹干后再點,以保證每點在紙上擴散的直徑最大不超過3mm.每人須點4個樣,其中3個是已知樣,1個是待測樣品.
(4)層析:用針,線將濾紙縫成筒狀,紙的兩側
邊緣不能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿中加入擴展劑,使其液面高度達到1cm左右,將點好樣的濾紙筒直立于培養皿中(點樣的一端在下,擴展劑的液面在A線下約1cm),罩上大燒杯,仍用塑料薄膜密封.當擴展劑上升到A線時開始計時,每隔一定時間測定一下擴展劑上升的高度,填入表3-1中.當上升到15~18cm,取出濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描出溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹干.
(5)顯色:用噴霧器在通風廚中向濾紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然后立即用熱風吹干,即可顯出各層析斑點,參見左圖.
(6)計算各種氨基酸的Rf值,并判斷混合樣品中都有哪些氨基酸,各人將自己的實驗結果貼在實驗報告上,見表3-2.
(7)以層析時間為橫坐標,擴展劑上升高度為縱坐標畫圖,求出擴展劑上升到18cm時所需要的時間.
(8)將微量注射器內外用蒸餾水清洗干凈,倒掉用過的展層液和平衡液,將培養皿洗凈,整理好桌面上的儀器和試劑.
是否所有氨基酸黃色反應都呈陽性結果?是否大部分蛋白質呈陽性反映?為什么?
不是,黃色反應是對R基團上有特定的基團的氨基酸才呈陽性結果 有這些氨基酸的蛋白質呈陽性反映