氨基酸的分析的三組檢驗方法?
1. 分光光度法氨基酸檢測:主要是利用氨基酸與衍生劑發生化學反應,產生藍紫色化合物,該化合物在某一波長處有最大吸收峰,根據吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生劑為茚三酮。
2. 毛細管電泳法氨基酸檢測:根據分離原理的不同,可分為毛細管區帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管等電電泳、毛細管等速電泳以及膠束電動力學毛細管電泳。其中,毛細管區帶電泳和膠束電動力學毛細管電泳可用于氨基酸檢測。
3. 近紅外光譜法氨基酸檢測:利用有機化合物的含氫基團在特定波長區域躍遷,產生光譜的變化,結合統計學方法間接地實現氨基酸的定量檢測。
4. 氣相色譜法氨基酸檢測:將氨基酸衍生化處理變為容易氣化的物質,根據氣態樣品中各組分在流動相和固定相中的分配系數的不同,實現對氨基酸的定量分析。
5. 高效液相色譜法氨基酸檢測:是最常用的一種氨基酸檢測方法。由于大多數氨基酸本身沒有紫外吸收和熒光反應,因此需要對樣品進行衍生化處理將其轉化為有紫外吸收和發射熒光的物質,衍生可分為柱前衍生和柱后衍生。
氨基酸液質分析 274是什么物質
液質流動相選甲醇和水體系是因為對于液相色譜而言,物質的分離是基于被測物在流動相和固定相間的分配比不同而獲得的,不管是不是中性物質,只要它們在兩相間的分配比不同就可以分離。而流動相的改變也不過是為了獲取這個分配比的差異而已。
液質流動相的選擇方法:
1、流動性主要看結構,極性大小,溶解性,對酸堿的敏感性等等。 大體上有機相是乙腈,甲醇,水相是甲酸水,乙酸水,甲醇水或者加點乙酸銨等。
2、再看化合物質譜條件是(+),則水相可加甲酸,乙酸,一般0.1%,也可以0.2%,可以是條件,原則是能濃度低就不要濃度高,(-),不要用酸,會有抑制。
3、液相分離效果,可以用不同的有機相:水相比例,是分離效果好就可以。
4、觀察uv最佳吸收是多少?若離200nm很近,建議有機相用乙腈。
5、重要的是,水相不加任何物質就可楚風很好,建議不要加其他的。
6、液質聯用所用的流動相,不能用不揮發性的物質,如:磷酸鹽緩沖液等,常用甲酸鹽,乙酸鹽等易揮發的物質用作緩沖鹽的首選。 在做液質聯用測定生物樣品時,若選擇M H峰可在流動相中加入一些添加劑提供H離子,如甲酸等,一般準分子離子峰較穩定。
7、液質聯用的流動相要求使用揮發性的酸堿鹽,常用的如下: 酸—甲酸、乙酸(<2.0%),三氟醋酸(≤0.5%) 堿—甲胺、乙胺、三乙胺(<1.0%) 鹽—醋酸銨(10-5mmol/L)。
氨基酸檢測?
你若是問蛋白質,我可以直接告訴你又雙縮脲試劑(中學階段),但氨基酸的檢驗比蛋白質麻煩多了.一、氨基酸的分離和檢測氨基酸的分離和檢測手段,以往用化學分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動分析儀.隨著高效液相色譜及填料的發展,HPLC在氨基酸檢測方面顯示了其特有的優越性.但大多數氨基酸無紫外吸收和熒光發射特性,為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性,通常將氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法與柱后衍生法.HPLC與各種衍生相結合的氨基酸分析技術,構成了具有廣泛適用性的現代氨基酸分析技術.x0d二、鑒定是哪種氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法.1、茚三酮反應 (ninhydrin reaction) 茚三酮(弱酸環境加熱) 紫色(脯氨酸、羥脯氨酸為黃色) (檢驗α-氨基)x0d2、坂口反應 (Sakaguchi reaction) 丙氨酸x0dα-萘酚+堿性次溴酸鈉 紅色 (檢驗胍基 精氨酸有此反應)x0d3、米隆反應(又稱米倫氏反應) HgNO3+HNO3+熱 紅色 (檢驗酚基 酪氨酸有此反應,未加熱則為白色)x0d4、Folin-Ciocalteau反應(酚試劑反應) 磷鎢酸-磷鉗酸 藍色 (檢驗酚基 酪氨酸有此反應)x0d5、黃蛋白反應 濃硝酸煮沸 黃色 (檢驗苯環 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應)x0d6、Hopkin-Cole反應(乙醛酸反應) 加入乙醛酸混合后徐徐加入濃硫酸 乙醛與濃硫酸接觸面處產生紫紅色環 (檢驗吲哚基 色氨酸有此反應)x0d7、Ehrlich反應 P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍色 (檢驗吲哚基 色氨酸有此反應)x0d8、硝普鹽試驗 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 (檢驗巰基 半胱氨酸有此反應)
檢驗氨基酸用什么方法?
1.茚三酮反應,氨基酸與其發生反應縮合成藍色物質。除開脯氨酸和羥脯氨酸,他們與其反應生成黃色衍生物。
2.桑格反應,氨基酸與其反應會生成黃色的2,4-二硝基氨基酸,可以用于鑒定多肽或蛋白質的N端氨基酸。
3.艾德曼反應(DNFB反應),即氨基酸與苯異硫氰酸反應生成相應的苯氨基硫甲酰氨基酸。