培養(yǎng)基包括哪些成分，各有什么作用，如何配制

1 無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物

無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物即無(wú)機(jī)鹽是植物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的，根據(jù)植物對(duì)無(wú)機(jī)鹽需要的多少，將其分為大量元素和微量元素。

1.1 大量元素

大量元素在植物體內(nèi)含量占干物重的0.1-10%，其濃度一般大于0.5mmol/L，包括氮（N）、磷（P）、鉀（K）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、硫（S），若加上碳（C）、氫（H）、氧（O），則有9種元素。

在離體培養(yǎng)中，其C、H、O三元素是從人工加入的糖類(lèi)獲得的，H、O元素也可以從培養(yǎng)基所含的水分中獲得，而其余6種礦質(zhì)元素要從加入的適量的無(wú)機(jī)鹽類(lèi)來(lái)獲取。

無(wú)機(jī)氮常以硝態(tài)氮（如KNO3）和銨態(tài)氮（如NH4NO3）兩種形式供應(yīng)，多數(shù)培養(yǎng)基都是二者兼而有之。

1.2 微量元素

植物所需的微量元素包括鐵（Fe）、硼（B）、錳（Mn）、銅（Cu）、鋅（Zn）、鉬（Mo）、氯（Cl）等。

植物對(duì)其需要量極微，在植物體內(nèi)含量占干物重的0.01%以下，起生長(zhǎng)發(fā)育所需的濃度一般小于0.5mmol/L，稍多則產(chǎn)生毒害。

碘（I）雖不是植物生長(zhǎng)的必需元素，但幾乎在所有的培養(yǎng)基中都含有碘元素，有些培養(yǎng)基還加入了鈷（Co）、鎳（Ni）、鈦（Ti）、鈹（Be），甚至鋁（Al）等元素。

1.3 鐵鹽

鐵是用量較多的一種微量元素，是許多重要氧化還原酶的組成成分，在植物葉綠素的合成過(guò)程中起到重要的作用。

若以硫酸鐵和氯化鐵為供鐵源，培養(yǎng)基的pH值會(huì)達(dá)到5.2以上，形成氫氧化鐵沉淀，使培養(yǎng)物無(wú)法吸收而出現(xiàn)缺鐵癥，故在培養(yǎng)基配制時(shí)，常用硫酸亞鐵和EDTA二鈉配成螯合態(tài)鐵，成為有機(jī)態(tài)鐵方被培養(yǎng)物吸收和利用；也可用EDTA鐵鹽，作為鐵的供應(yīng)源。

這些元素參與培養(yǎng)物機(jī)體的建造，構(gòu)成植物細(xì)胞中的核酸、蛋白質(zhì)、葉綠體、酶系統(tǒng)和生物膜所必需的元素。

2 有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分

在配制培養(yǎng)基時(shí)，不僅要加入無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分，還要加入一定量的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以利于培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和分化。

2.1 糖類(lèi)

在組織快繁中，被培養(yǎng)的培養(yǎng)物大多不能進(jìn)行光合作用，能進(jìn)行的也不能滿(mǎn)足其對(duì)糖類(lèi)的需求，因此必須在培養(yǎng)基中添加糖作為碳源和能源，同時(shí)對(duì)維持培養(yǎng)基一定的滲透壓也有重要作用。

最重要的碳源是蔗糖，其濃度一般為2%-3%。葡萄糖和果糖也是較好的碳源。在大規(guī)模工廠化生產(chǎn)中，為了降低生產(chǎn)成本，可用市售的白砂糖代替蔗糖，也有同樣的效果。

2.2 維生素

維生素常以輔酶形式參與生物催化劑——酶系的活動(dòng)，以及參與細(xì)胞的蛋白質(zhì)代謝、脂肪代謝、糖代謝等重要生命活動(dòng)。

在組培中以B族維生素為主，常使用鹽酸硫胺素（維生素B1）、鹽酸吡哆醇（維生素B6）、煙酸（維生素B3）、鈷胺素（維生素B12）、葉酸（維生素Bc）、生物素（維生素H）、抗壞血酸（維生素C）等，一般使用濃度為0.1-1.0mg/L。

2.3 肌醇（環(huán)己六醇）

在組培中，肌醇本身不直接促進(jìn)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)，可有助于活性物質(zhì)作用的發(fā)揮，提高維生素B1的效果，參與碳水化合物代謝、磷脂代謝和離子平衡作用，從而促進(jìn)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和胚狀體及芽的形成。在配制培養(yǎng)基時(shí)，肌醇通常使用濃度為50-100mg/L。

2.4 氨基酸

在培養(yǎng)基中要加入一種或數(shù)種氨基酸，最常使用的是甘氨酸（Gly），有時(shí)用到絲氨酸（Ser）、酪氨酸（Tyr）、谷氨酰胺（Gln）、天冬酰胺（Asn）等，作為重要的有機(jī)氮源。

甘氨酸能促進(jìn)離體根的生長(zhǎng)，對(duì)其培養(yǎng)物的生長(zhǎng)有良好的促進(jìn)作用，通常用量為2-3mg/L。

有時(shí)也采用水解乳蛋白（LH）或水解絡(luò)蛋白（CH），它們是牛乳用酶法等加工而成的水解產(chǎn)物，是含有約20種氨基酸的混合物，通常用量為500mg/L。

2.5 有機(jī)附加物

在組培中，人們發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中添加一些天然的有機(jī)物或提取物對(duì)培養(yǎng)物的增殖和分化有明顯的促進(jìn)作用。

例如椰乳（CM），一般用量為10%-20%（或100-150mg/L）；酵母提取物為0.5%；番茄汁為5%-10%；香蕉泥為100-200mg/L；馬鈴薯用量為150-200g/L，去皮和去芽后，煮30分鐘，再過(guò)濾，即可加入培養(yǎng)基中。

馬鈴薯、香蕉泥具有較大的pH緩沖作用。這些天然有機(jī)物的作用是為培養(yǎng)物提供一些必要的營(yíng)養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長(zhǎng)激素等。但由于這些天然有機(jī)物成分較復(fù)雜，且難確定，含量又不穩(wěn)定，所以應(yīng)盡量避免使用。

3?植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)

在組培中，為了促進(jìn)培養(yǎng)物生長(zhǎng)和器官分化，其培養(yǎng)基除加入營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還必須加入一種或多種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)（植物激素）是培養(yǎng)基中的關(guān)鍵物質(zhì)，在組培中起著決定的作用。一般常用生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素類(lèi)。

我們將在后期專(zhuān)門(mén)安排一期介紹植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的在組培中的作用。

3.1 生長(zhǎng)素類(lèi)

組培中，生長(zhǎng)素類(lèi)的作用是誘導(dǎo)愈傷組織的形成，胚狀體的產(chǎn)生以及試管苗的生根，更重要的是細(xì)胞分裂素配成一定的比例誘導(dǎo)腋芽及不定芽的產(chǎn)生。

生長(zhǎng)素類(lèi)常用的有吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）。2,4-D一般用于初代培養(yǎng)，啟動(dòng)細(xì)胞脫分化，而再分化階段往往不用2,4-D，而用NAA、IBA、IAA；在生根誘導(dǎo)中一般多用IBA。

3.2 細(xì)胞分裂素類(lèi)

在進(jìn)行組培中，常將細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配合使用，即細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例大時(shí)，促進(jìn)芽的形成，這時(shí)細(xì)胞分裂素起到主導(dǎo)作用；比例小時(shí)，則有利于根的形成，這時(shí)生長(zhǎng)素起主導(dǎo)作用。培養(yǎng)基中的細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素之間的比例是決定器官分化的關(guān)鍵。

細(xì)胞分裂素類(lèi)常用的有：激動(dòng)素（KT）、6-芐氨基嘌呤（6-BA/BA/BAP）、玉米素（ZT）、2-異戊烯腺嘌呤（2-ip）、吡效隆（CPPU）和噻重氮苯基脲（TDZ）。但在組培中通常使用人工合成的6-BA和KT，因他們性能穩(wěn)定且價(jià)格適中。

4?瓊脂

依據(jù)態(tài)相不同，培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，其區(qū)別在于加入瓊脂與否，若加入瓊脂便形成膠體狀態(tài)的固體培養(yǎng)基，而不加則為液體培養(yǎng)基。

瓊脂是最好的固化劑，他是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物，在培養(yǎng)基中本身不具營(yíng)養(yǎng)，它的主要作用是使培養(yǎng)基在常溫下凝固，一般使用量為0.6-1.0%。

培養(yǎng)基的pH值偏酸，高壓滅菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，溫度過(guò)高均會(huì)影響其凝固力。瓊脂一般以色淺、透明、潔凈為好，新買(mǎi)來(lái)的瓊脂要先試驗(yàn)一下它的凝固能力，以便確定其適宜的用量。

5?活性炭

在培養(yǎng)基中加入活性炭（AC），其目的主要是利用其吸附能力，減少一些有害物質(zhì)的不利影響，同時(shí)也創(chuàng)造暗環(huán)境，對(duì)某些植物誘導(dǎo)生根有利。

一般認(rèn)為活性炭之所以有強(qiáng)大的吸附能力，主要是通過(guò)氫鍵、范德華力等作用力，把有毒物質(zhì)從外植體周?chē)降簟?/p>

活性炭除了有吸附作用外，在一定程度上還降低光照強(qiáng)度，從而減輕褐變。

但是，活性炭對(duì)物質(zhì)的吸附無(wú)選擇性，既吸附有毒酚類(lèi)的同時(shí)，又吸附培養(yǎng)基中的有利物質(zhì)，如生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、維生素B6、葉酸、煙酸等，并且在不同植物的組培中有效程度不一。因此，在決定使用活性炭時(shí)應(yīng)先試驗(yàn)再確定是否采用，通常使用濃度0.1%-0.5%。

氨基酸固體培養(yǎng)基的概述

培養(yǎng)一般是液體培養(yǎng)基,成分主要是水、葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清；而植物培養(yǎng)基用合成培養(yǎng)基就可以了,一般是固體培養(yǎng)基,成分主要是礦質(zhì)元素、蔗糖、纖維素、植物激素、有機(jī)添加劑.其次是各自培養(yǎng)的原理上的不同,微生物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是微生物細(xì)胞的增殖,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是細(xì)胞的增殖,植物細(xì)胞培養(yǎng)原理是細(xì)胞的全能性..

培養(yǎng)基有多少種氨基酸

培養(yǎng)基應(yīng)該按照培養(yǎng)物的需求提供氨基酸，自然界中存在20種氨基酸

氨基酸如何加入培養(yǎng)基中？急！！！

樓上兩個(gè)真是扯淡。

氨基酸、維生素等高溫易變質(zhì)的成分不能高溫滅菌。粉末可以用紫外滅菌過(guò)夜，液體用0.22μm濾膜過(guò)濾滅菌。濾膜裝到過(guò)濾器上，連上裝滿(mǎn)溶液的注射器，用注射器緩慢推進(jìn)。

氨基酸加入培養(yǎng)基中對(duì)pH的影響怎么處理

氨基酸加入培養(yǎng)基中對(duì)pH的影響怎么處理

1、培養(yǎng)基配方的選定

同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來(lái)源。

2、培養(yǎng)基的制備記錄

每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱(chēng)，配方及其來(lái)源，和各種成份的牌號(hào)，最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳椋瑥?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。

3、培養(yǎng)基成分的稱(chēng)取

培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱(chēng)取并要注意防止錯(cuò)亂，最好一次完成，不要中斷。可將配方置于傍側(cè)，每稱(chēng)完一種成分即在配方面軍做出記號(hào)，并將所需稱(chēng)取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱(chēng)取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱(chēng)取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。

4、培養(yǎng)基各成份的混合和溶化

培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。最好使用不銹鋼萵加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。

5、培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正

因培養(yǎng)基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì)有所變化，培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的最終PH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。PH調(diào)整后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。

6、培養(yǎng)基的過(guò)濾澄清

液體培養(yǎng)基必須絕對(duì)澄清，瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無(wú)顯著沉淀，因此 ，須要采用過(guò)濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾法，濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。

瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過(guò)濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過(guò)濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復(fù)過(guò)濾。如過(guò)濾法不能達(dá)到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶?jī)?nèi)，裝入量不得超過(guò)燒瓶容量的1/2，每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個(gè)雞蛋的蛋白，強(qiáng)力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過(guò)濾即可。

7、培養(yǎng)基的分裝

培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過(guò)容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時(shí)最好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí)，分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌，以為測(cè)定該批培養(yǎng)基最終pH之用。

8、培養(yǎng)基的滅菌

一般培養(yǎng)基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基制備方法中，如無(wú)特殊規(guī)定，即可用此法滅菌。

某些畏熱成分，如糖類(lèi)，應(yīng)另行配成20%或更高的濃液，以過(guò)濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無(wú)菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應(yīng)以無(wú)菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50°C左右的培養(yǎng)基中。

瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時(shí)，擺置成適當(dāng)斜面，待其自然凝固。

9、培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試

每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測(cè)定其最終pH。

將全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過(guò)夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，即棄去。

用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時(shí)，如無(wú)菌生長(zhǎng)或生長(zhǎng)不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。

10、培養(yǎng)基的保存

培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時(shí)間不宜超過(guò)一周，傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過(guò)3天。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁(yè)或明顯標(biāo)簽。