氨基酸混合標準品如何判斷是哪一種氨基酸？

你好，氨基酸混合樣品，通常是氨基酸溶于0.1 mol/L的HCl水溶液，如果你僅僅買了混標，你有下列選擇：1 買一根氨基酸分析專用柱，按色譜柱廠家提供的方法(柱前衍生化方法+液相分析方法)分析，然后和色譜柱廠家的譜圖對比找峰；2 買一臺氨基酸分析以，按儀器廠家提供的方法(一般是離子交換柱分離+柱后衍生)測試，與儀器廠家的譜圖對比找峰。

氨基酸混合溶液-氨基酸標準溶液為何僅含有17種氨基酸？

氨基酸，是羧酸碳原子上的氫原子被氨基取代后的化合物，氨基酸分子中含有氨基和羧基兩種官能團。與羥基酸類似，氨基酸可按照氨基連在碳鏈上的不同位置而分為α-，β-，γ-…w-氨基酸，但經蛋白質水解后得到的氨基酸都是α-氨基酸，而且僅有二十幾種，他們是構成蛋白質的基本單位。

從植物葉片中提取復合氨基酸

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1.3 方法?

1.3.1 供試樣品的制備?

采取3個月生植株上的完整健全葉片，在80℃干燥箱中烘干，粉碎，準確稱取0.5 g于10 mL安瓿瓶中，加入6 mol/L的HCl 7 mL，充入高純N2，將安瓿瓶封口，置于105℃恒溫干燥箱中消化過夜。冷卻后過濾，濾液濃縮近干，加5 mL0.1 mol/L的HCl溶解，取1.5 ml至1.5 ml離心管中，10000轉/min離心10 min，取上清液900 ul加入100ul 5nmol/ul內標物SAR，混勻后作為供試樣品。?

1.3.2 標準溶液的制備?

5 nmol/L內標液制備：精密稱取SAR 22.3 mg以0.1 mol/L HC1定容至50 mL。?

500 pmol/L內標液制備：精密吸取5 nmol/L內標液5 mL以0.1mol/L HC1定容至50 mL。?

900 pmol/L氨基酸混合標液制備：精密吸取900 ul 1000pmol/L氨基酸混合標液加入5 nmol/L內標液100 ul；?

225 pmol/L氨基酸混合標液制備：精密吸取900 ul 250pmol/L氨基酸混合標液加入5 nmol/L內標液100 ul；?

90 pmol/L氨基酸混合標液制備：精密吸取900 ul 100pmol/L氨基酸混合標液加入5 nmol/L內標液100 ul。?

1.3.3 色譜條件?

樣品自動柱前衍生化程序：吸取硼酸緩沖液5 ul，再吸取OPA試劑1 ul，洗針1次，吸取樣品1 ul，原位混合6次。吸取FMOC試劑1 ul，洗針1次，原位混合3次，進樣。?

色譜柱：Hypersil AA-ODS C18 2．1×200 mm?

流動相A：醋酸鈉1.36±0.025 g，加入純水500 mL溶解，加EDTA溶液50 ul，再加三乙胺90 ul，用1％-2％ 醋酸調pH= 7.20±0.05，再加入四氫呋喃1.5 mL，混合均勻。?

流動相B：醋酸鈉1.36±0.025 g，加入純水100 mL溶解，用1％一2％ 醋酸調pH=7.20±0.05，將此溶液加至乙腈200 mL和甲醇200 mL的混合物中，并混合均勻。 ?

柱溫：40℃ 紫外檢測波長：338 nm；?

梯度洗脫：流動相A：以0.45ml/min在0-17min由100%減至40%，17min-18min由40%減少至0；流動相B：以0.45ml/min在0-17min由0增至60%，17min-18min由60%增至100%，18.1min-23.9min流速由0.45ml/min-?0.80ml/min?，運行至24min結束。?

1.3.4 測定方法和數據處理?

分別精密量取對照品溶液和供試樣品各1 ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至脯氨酸峰出峰后即得。以3種濃度的標樣制作校正表，按Agilent公司提供的氨基酸分析軟件包進行數據處理。?

2 結果與分析?

2.1 紫蘇屬植物葉片中氨基酸組成及含量比較?

27份材料葉片中均測得17種氨基酸，其氨基酸種類較齊全。所測氨基酸中以甘氨酸平均含量最高，達6.68mg/g，其次是亮氨酸和谷氨酸，分別為4.77mg/g和4.59mg/g。與人體健康關系最為密切的賴氨酸平均含量有1.87mg/g。7種必需氨基酸總量平均為14.58mg/g，占氨基酸總量的比例為32.43%。?

氨基酸總量超過50 mg/g的材料共有6份（P06-11紫、P06-6、P06-7、P06-12紫、P06-15紫、P06-13），其中材料P06-7氨基酸總量最高，達57.65mg/g ，較總含量最低的材料P06-33多23.07 mg/g。17種氨基酸中有9種氨基酸（天冬氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸）含量均以P06-7最高，而有6種氨基酸（絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸）含量的最低值出現在P06-33中。必需氨基酸含量變化范圍在11.10 -19.55 mg/g之間，仍以P06-7為最高。非必需氨基酸含量的變化趨勢與氨基酸總量的變化趨勢大致相同。?

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各氨基酸在材料間的變異較大。變異系數最大的是脯氨酸，達59.19%，其次是組氨酸和賴氨酸，分別為29.91%和25.63%。異亮氨酸的變異系數最小，為11.34%，其它氨基酸的變異系數均在10%-20%之間。氨基酸總量、必需氨基酸和非必需氨基酸含量的變異系數在10%-15%之間。