什么防腐劑能防止氨基酸混合液變質(zhì)
大部分防腐劑是有害的。長期進(jìn)食有大量防腐劑的食物,對(duì)人體健康有不良影響。防腐劑的作用,是防止微生物的生長,或防止食物氧化。 在抗微生物方面,防腐劑可防止霉菌、酵母、及細(xì)菌的生長。在抗氧化方面,防腐劑防止食物腐臭、或產(chǎn)生黑色的斑點(diǎn),防腐劑可抑壓食物與氧氣在光、熱、及某些金屬的環(huán)境下產(chǎn)生的化學(xué)作用,也會(huì)減少一些重要的氨基酸受破壞,而氨基酸是蛋白質(zhì)的基本元素;抗氧化劑亦會(huì)減低一些維生素的流失。 并不是所有的防腐劑都有毒。幾乎所有的瓶裝橙汁(非鮮榨)中的維C含量都很高,它就是作為調(diào)節(jié)PH值從而防止飲料變質(zhì)的角色出現(xiàn)的。在選用食品時(shí)盡量選擇不含防腐劑的。不過有一些包裝食品怎么選都是含防腐劑的,比如苯甲酸鈉,山梨酸鉀,這些就是防腐劑。那你就盡量選含有后者的,相對(duì)是一種較高級(jí)較安全的防腐劑。
氨基酸混合溶液-氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液為何僅含有17種氨基酸?
氨基酸,是羧酸碳原子上的氫原子被氨基取代后的化合物,氨基酸分子中含有氨基和羧基兩種官能團(tuán)。與羥基酸類似,氨基酸可按照氨基連在碳鏈上的不同位置而分為α-,β-,γ-…w-氨基酸,但經(jīng)蛋白質(zhì)水解后得到的氨基酸都是α-氨基酸,而且僅有二十幾種,他們是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位。
求問怎么用離子交換樹脂層析分離混合氨基酸
【原理】離子交換樹脂是一種合成的高聚物,不溶于水,能吸水膨脹。高聚物分子由能電離的極性基團(tuán)及非極性的樹脂組成。極性基團(tuán)上的離子能與溶液中的離子起交換作用,而非極性的樹脂本身物性不變。通常離子交換樹脂按所帶的基團(tuán)分為強(qiáng)酸(=R=S03H)、弱(=COOH)、強(qiáng)堿 (=N+=R:)和弱堿(=NH2=NHR=NR2)。
離子交換樹脂分離小分子物質(zhì)如氨基酸、腺苷、腺苷酸等是比較理想的。但對(duì)生物大于物質(zhì)如蛋白質(zhì)是不適當(dāng)?shù)模驗(yàn)樗鼈儾荒軘U(kuò)散到樹脂的鏈狀結(jié)構(gòu)中。故如分離生物大子、可選用以多糖聚合物如纖維素、葡聚糖為載體的離子交換劑。
本實(shí)驗(yàn)用磺酸陽離子交換樹脂分離酸性氨基酸(天冬氨酸)、中性氨基酸(丙氨酸)堿性氨基酸(賴氨酸)的混合液。在特定的pH條件下,它們解離程度不同,通過改變脫液的pH或離子強(qiáng)度可分別洗脫分離。
【材料】1.實(shí)驗(yàn)器材層析柱(1.6X20cm);恒流泵;梯度混合器;試管及試管架;紫外分光光度計(jì)、磺酸陽離子交換樹脂(Dowex 50)
2.實(shí)驗(yàn)試劑
(1)2mol/L HCl
(2)2mol/L NaOH
(3)0.1mOl/L HCl
(4) 0.1mol/L NaOH
(5)pH4.2的檸檬酸緩沖液:0.lmol/L檸檬酸54m1加0.1mol/L檸檬酸鈉46ml
(6)pH5的醋酸緩沖液:0.2mol/L NaAc 70ml加 0.2mol/L HAc 30ml
(7)0.2%中性茚三酮溶液:0.2g茚三酮加100ml丙酮
(8)氨基酸混合液:丙氨酸、天冬氨酸、賴氨酸各10m1加0.1mol/L HCl 3m【方法】
1. 樹脂的處理
100ml燒杯中置約10g樹脂,加25ml 12mo1/L HCl攪拌2h,傾棄酸液,用蒸餾水充洗滌樹脂至中性。加25ml 12mol/L NaOH至上述樹脂中攪拌2h,傾棄堿液,用蒸餾水洗滌至中性。將樹脂懸浮于50ml pH4.2檸檬酸緩沖液中備用。
2. 裝柱取直徑0.8cm~1.2cm、長度 10cm~12cm的層析柱,底部墊玻璃棉或海綿圓墊,自頂部注入經(jīng)處理的上述樹脂懸浮液,關(guān)閉層柱出口,待樹脂沉降后,放出過量的溶液,在加入一些樹脂,至樹脂沉積至8cm~10cm高度即可。于柱子頂部繼續(xù)加入pH4.2檸檬酸緩沖液洗滌,使流出液pH為4.2為止,關(guān)閉柱子出口,保持液面高出樹脂表面1cm左右。
3. 加樣、洗脫及洗脫液收集
打開山口使緩沖液流出,待液面幾乎平齊樹脂表面時(shí)關(guān)閉出口(不可使樹脂表面干燥)。用長滴管將15滴氨基酸混合液仔細(xì)直接加到樹脂頂部,打開出口使其緩慢流入柱內(nèi)。當(dāng)液面剛平樹脂表面時(shí),加入0.1mol/L HCl 3ml,以10滴/min~12滴/min的流速洗脫,收集洗脫液,每管20滴,逐管收存。當(dāng)HCl液面剛平樹脂表面時(shí),用1m1 pH4.2檸檬酸緩沖液沖洗柱壁一次,接著用2ml pH4.2檸檬酸緩沖液洗脫,保持流速10滴/min~12滴/min并注意勿使樹脂表面干燥。
在收集洗脫液的過程中,逐管用茚三酮檢驗(yàn)氨基酸的洗脫情況,方法是:于各管洗脫液中加10滴pH5醋酸緩沖液和10滴中性茚三酮溶液,沸水浴中煮10min,如溶液呈紫藍(lán)色,表示已有氨基酸洗脫下來。顯色的深度可代表洗脫的氨基酸濃度,可比色測(cè)。
在用pH4.2檸檬酸緩沖液把第二個(gè)氨基酸洗脫出來之后,再收集兩管茚三酮反應(yīng)陰性部分,關(guān)閉層析柱出口,將樹脂頂部剩余的pH4.2檸檬酸緩沖液移去。
于樹脂頂部加入2ml 0.1mo1/L NaOH,打開出口使其緩慢流入柱內(nèi),按上面I續(xù)用0.1mo1/L NaOH洗脫并逐管收集 (注意仍然保持流速10滴/min~12滴/min),每管20滴。做洗脫液中氨基酸檢驗(yàn),在第三個(gè)氨基酸用0.1mo1/L NaOH洗脫下來以后,再繼續(xù)收集兩管茚三酮反應(yīng)陰性部分。
最后以洗脫液管號(hào)為橫坐標(biāo),洗脫液各管光密度(以水作空白,在570nm波長讀取吸光度)或顏色深淺(以 -,±,+,++...表示)為縱坐標(biāo)作圖,即可畫出一條洗脫曲線。
【注意事項(xiàng)】
1. 一直保持流速10滴/min~12滴/min,并注意勿使樹脂表面干燥。
2. 在裝柱時(shí)必須防止氣泡、分層及柱子液面在樹脂表面以下等現(xiàn)象發(fā)生。
如何從蛋白質(zhì)和氨基酸混合液中分離出蛋白?
雖然我沒學(xué)過,但是感覺上哈,可以用層析……隨流動(dòng)相走開的就是氨基酸,剩下的就是蛋白質(zhì)嘍,想想這其實(shí)不現(xiàn)實(shí),層析的梁太少
或許可以先加高濃度的鹽,蛋白質(zhì)鹽析,然后沉淀后再過濾,再稀釋溶解
純屬瞎猜,或許可行
紙層析實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟及現(xiàn)象
氨基酸的紙層析 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.了解并掌握氨基酸紙層析的原理和方法.2.學(xué)習(xí)紙層析法的操作技術(shù),分析未知樣品氨基酸的成分.二、 實(shí)驗(yàn)原理 用濾紙為支持物進(jìn)行層析的方法,稱為紙層析法,它是分配層析法的一種.紙層析所用的展層溶劑大多是由水飽和的有機(jī)溶劑組成.濾紙纖維的—OH 基的親水性基團(tuán),可吸附有機(jī)溶劑中的水作為固定相,有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相,它沿濾紙自下向上移動(dòng),稱為上行層析;反之,使有機(jī)溶劑自上而下移動(dòng),稱為下行層析.將樣品點(diǎn)在濾紙上進(jìn)行展層,樣品中的各種氨基酸即在二相中不斷進(jìn)行分配,由于它們各自的分配系數(shù)不同,故在流動(dòng)相中移動(dòng)速率不等,從而使不同的氨基酸得到分離和提純.紙層析法主要是依據(jù)混合組分對(duì)二相分配系數(shù)的差異進(jìn)行分離,但亦存在著某種程度的吸附作用和離子交換現(xiàn)象.氨基酸經(jīng)層析在濾紙上形成距原點(diǎn)不等的層析點(diǎn),氨基酸在濾紙上的移動(dòng)速率用Rf 表示.Rf = 原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離 只要實(shí)驗(yàn)條件(如溫度、展層溶劑的組分、pH、濾紙的質(zhì)量等)不變,Rf 值是常數(shù),因此可做定性分析參考.如果溶質(zhì)中氨基酸組分較多或其中某些組分的Rf 值相同或近似,用單向?qū)游霾灰藢⑺鼈兎珠_,為此可進(jìn)行雙向?qū)游?在第一溶劑展開后將濾紙轉(zhuǎn)動(dòng)90度,以第一次展層所得的層析點(diǎn)為原點(diǎn),再用另一種溶劑展層,即可達(dá)到分離目的.由于氨基酸無色,可利用茚三酮反應(yīng)使氨基酸層析點(diǎn)顯色,從而定性和定量.三、儀器和試劑 儀器 層析濾紙、燒杯、剪刀、層析缸、培養(yǎng)皿、猴頭噴霧器、微量加樣器或毛細(xì)管、吹風(fēng)機(jī)一個(gè)、直 尺、鉛筆等.試劑 1.混合氨基酸溶液(水解后的氨基酸干粉) 甘氨酸溶液:50mg 甘氨酸溶于5mL 水中.蛋氨酸溶液:25mg 蛋氨酸溶于5mL 水中.亮氨酸溶液:25mg 亮氨酸溶于5mL 水中.氨基酸混合液:甘氨酸50mg,亮氨酸25mg,蛋氨酸25mg 共溶于5mL 水中.2.展層溶劑 堿相溶劑:正丁醇∶12%氨水∶95%乙醇 = 13∶13∶13(V/V) 酸相溶劑:正丁醇∶80%甲酸∶水 = 15∶3∶2(V/V),搖勻后放置半天以上,取上清液備用.3.顯色貯備液:0.4mol/L 茚三酮—異丙醇∶甲酸∶水=20∶1∶5.4.0.1%硫酸銅:75%乙醇=2∶38,臨用前按比例混合.四、實(shí)驗(yàn)步驟 (1)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸單向上行層析法 1.畫基線 戴上指套或橡皮手套,在長約20cm、寬約17cm 濾紙上,距短邊2.5cm 處,用鉛筆畫一條線,即為基線.2.點(diǎn)樣 在原線上,從距紙的長邊4cm處開始,每隔3cm 用微量注射器或毛細(xì)管依次分別點(diǎn)上甘氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和混合氨基酸溶液.點(diǎn)樣點(diǎn)干后可重復(fù)點(diǎn)加1~2次.每一點(diǎn)的直徑不超過2mm,點(diǎn)樣量以每種氨基酸含5~20ug 為宜.3.展層 將點(diǎn)好樣的濾紙卷成筒形,濾紙兩邊不相接觸,用線固定好,將原線的下端浸入盛有溶劑的培養(yǎng)皿中,不需平衡可立即展層.展層劑為酸性溶劑系統(tǒng),在展層溶劑中加入顯色貯備液(每10mL 展層劑加0.0.5mL 的顯色貯備液)進(jìn)行展層,基線必須保持在液面之上,以免氨基酸與溶劑直接接觸.蓋好層析缸,當(dāng)溶劑前沿距紙端2cm 時(shí)(大約3h),取出濾紙.4.顯色 濾紙取出后,吹干或在80℃左右烘箱內(nèi)烘3~5min,即出現(xiàn)紫紅色的氨基酸層析 斑點(diǎn).用鉛筆劃下層析斑點(diǎn),可進(jìn)行定性、定量測(cè)定.(2)混合氨基酸雙向上行紙層析法 1.濾紙準(zhǔn)備 將濾紙裁成約28cm2的正方形,在距濾紙相鄰兩邊各2cm 處的交點(diǎn)上,用鉛筆劃下一點(diǎn),做為原點(diǎn).2.點(diǎn)樣 取混合氨基酸溶液(5mg/mL)10~15μL,分別點(diǎn)在原點(diǎn)上.3.展層與顯色 將點(diǎn)好樣的濾紙卷成半筒形,立在培養(yǎng)皿中,原點(diǎn)應(yīng)在下端.取少量12%的氨水與小燒杯中,蓋好層析缸,平衡過夜.次日,取出氨水,加適量堿相溶劑(第一向)與培養(yǎng)皿中,蓋好層析缸,上行展層,當(dāng)溶劑前沿距濾紙上端1~2cm 時(shí),取出濾紙,冷風(fēng)吹干.將濾紙轉(zhuǎn)90o,再卷成半筒形,豎立在干凈培養(yǎng)皿中,并于小燒杯中至少量酸相溶劑,蓋好層析缸,平衡過夜,次日將加顯色劑的酸性溶劑(每10mL 展層劑加0.0.5mL 的顯色貯備液)傾入培養(yǎng)皿中,進(jìn)行第2向展層.展層畢,取出濾紙,用熱風(fēng)吹干,藍(lán)紫色斑點(diǎn)即顯現(xiàn).五、計(jì)算 單向?qū)游龅腞f 值,按 “Rf = 原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離”計(jì)量后計(jì)算.雙向?qū)游鯮f 值,由兩個(gè)數(shù)值組成,在第一向計(jì)量一次,第二向計(jì)量一次,分別與已知的氨基酸在酸堿系統(tǒng)的Rf 值對(duì)比,即可初步?jīng)Q定它為何種氨基酸的斑點(diǎn),將它剪下,在同一張紙剪下一塊大小相同的空白紙作為對(duì)照,用硫酸銅—乙醇溶液洗脫,用722型分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出氨基酸的含量.
在PH3左右,氨基酸混合液(酸性,堿性,中性三類),經(jīng)陽離子交換樹脂被洗脫分離,這三類氨基酸的洗脫順序
順序:堿性氨基酸>中性氨基酸>酸性氨基酸
由于是交換樹脂層析,氨基酸的與樹脂的親和力主要取決于他們之間的親和力,其次是氨基酸與樹脂之間的疏水相互作用。由于緩沖液先是堿性,所以氨基酸與樹脂的親和力為:酸性氨基酸》中性氨基酸堿性氨基酸(陰離子樹脂的疏水基團(tuán)帶正電,負(fù)電被交換了)。
擴(kuò)展資料:
氨基酸結(jié)晶的熔點(diǎn)較高,一般在200~300℃,許多氨基酸在達(dá)到或接近熔點(diǎn)時(shí)會(huì)分解成胺和CO2。
絕大部分氨基酸都能溶于水。不同氨基酸在水中的溶解度有差別,如賴氨酸、精氨酸、脯氨酸的溶解度較大,酪氨酸、半胱氨酸、組氨酸的溶解度很小。各種氨基酸都能溶于強(qiáng)堿和強(qiáng)酸中。但氨基酸不溶或微溶于乙醇。
參考資料來源:百度百科-酸性氨基酸