層析法分離氨基酸的原理是?

二、原理

紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分 配層析法,其中濾紙纖維上吸附的水是固定相 水是固定相,配層析法,其中濾紙纖維上吸附的水是固定相,展層用的有機(jī)溶劑是流動(dòng)相 在層析時(shí),有機(jī)溶劑是流動(dòng)相.展層用的有機(jī)溶劑是流動(dòng)相.在層析時(shí),

將樣品點(diǎn)在距濾紙一端約2～的某一處,將樣品點(diǎn)在距濾紙一端約 3cm的某一處,的某一處 該點(diǎn)稱為原點(diǎn)； 該點(diǎn)稱為原點(diǎn)；然后在密閉容器中層析溶劑 沿濾紙的一個(gè)方向進(jìn)行展層,沿濾紙的一個(gè)方向進(jìn)行展層,這樣混合氨基 酸在兩相中不斷分配.由于分配系數(shù)（ 酸在兩相中不斷分配.由于分配系數(shù)（Kd） 不同,結(jié)果它們分布在濾紙的不同位置上.不同,結(jié)果它們分布在濾紙的不同位置上.物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置,物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置,可用 比移值（ 來表示.比移值（Rf）來表示.所謂R 是指在紙層析中,所謂 f,是指在紙層析中,從原點(diǎn)至氨基酸 停留點(diǎn)（又稱為層析點(diǎn)）中心的距離（ ） 停留點(diǎn)（又稱為層析點(diǎn)）中心的距離（X）與 原點(diǎn)至溶劑前沿的距離（ ）的比值.原點(diǎn)至溶劑前沿的距離（Y）的比值.如圖

原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離 X Rf = = Y 原點(diǎn)到溶劑前沿的距離

在一定條件下（如溫度、展層劑的組成、 在一定條件下（如溫度、展層劑的組成、 層析紙質(zhì)量等不變）,某種物質(zhì)的R ）,某種物質(zhì)的 層析紙質(zhì)量等不變）,某種物質(zhì)的 f 值是常 因此可作為定性依據(jù).數(shù),因此可作為定性依據(jù).由于氨基酸無色,由于氨基酸無色,可利用茚三酮反應(yīng)使 氨基酸層析斑點(diǎn)顯色,從而作定性分析.氨基酸層析斑點(diǎn)顯色,從而作定性分析.本 實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸.實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸.

氨基酸解離步驟是什么?

氨基酸解離的過程如下：

兩性離子溶于水時(shí)，其正負(fù)離子都能解離，但解離度與溶液的pH知有關(guān)，向該溶液中加入酸時(shí)，其兩性離子的-COO-負(fù)離子在電場(chǎng)中向負(fù)極移動(dòng)，加入堿性時(shí)，其兩性離子的-NH3+正離子釋放出質(zhì)子，其自身成為負(fù)離子，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)，這一過程稱兩性解離。

其原理是：所有氨基酸都含有堿性的氨基（或亞氨基）和酸性的羧基，因而能在酸性溶液中與質(zhì)子結(jié)合而呈陽(yáng)離子，也能在堿性溶液中與OH結(jié)合，失去質(zhì)子而變成陰離子。

擴(kuò)展資料：

氨基酸解離的兩種常見形式：

1、鹽析主要是利用不同蛋白質(zhì)在不同濃度的中性鹽溶液中的溶解度不同，向蛋白質(zhì)溶液加入中性鹽，破壞水化膜和電荷兩個(gè)穩(wěn)定因素，使蛋白質(zhì)沉淀。

2、透析主要是利用僅有小分子化合物能通透半透膜，使大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分離，達(dá)到除鹽目的。凝膠過濾柱內(nèi)填充帶小孔的葡聚糖顆粒，可將蛋白質(zhì)按分子量大小不同而分離。

參考資料來源：百度百科：氨基酸兩性解離性

氨基酸的分離分析方法常有有哪些

如果是兩個(gè)氨基酸的保留時(shí)間距離太近，那么只能調(diào)整液相條件了。

比如調(diào)整流動(dòng)相比例，或者是梯度比例，把兩個(gè)氨基酸拉開。

也可以適當(dāng)調(diào)整衍生程序。

雖然衍生程序不會(huì)對(duì)氨基酸的保留時(shí)間有影響，不過會(huì)對(duì)它的信號(hào)產(chǎn)生影響。

如果這兩種氨基酸的峰高有所下降，或許分離度也可以達(dá)到要求。

還有就是注意峰型。

衍生化程序很容易損壞色譜柱，超高效色譜的壓力又高，色譜柱很容易損毀。

如果峰型不好，建議用純乙腈低流速反沖色譜柱。

或者是更換新色譜柱。