測定氨基酸標(biāo)準品,查文獻發(fā)現(xiàn)基本上都是用0.1M鹽酸溶解進液質(zhì)檢測，為什么用0.1M鹽酸?

想要滴定，一般需要準確的酸濃度，這需要強電解質(zhì)的酸，這一點，對應(yīng)二元的硫酸來說就不太適合。（可以查，硫酸的第二個H離子的電離平衡常數(shù)，非完全電離，只是電離率較高）；

而常見的酸也就是鹽酸、硫酸、硝酸。鹽酸的不具有氧化性，可以減少副反應(yīng)。所以選鹽酸。

此外，滴定的時候，要用稀溶液，才能減小滴定過程中的誤差。

胰島素的種類有哪些？

胰島素制劑按照來源不同可分為豬胰島素、牛胰島素及人胰島素。豬胰島素是從豬胰臟提取的；牛胰島素是從牛胰臟提取的；人胰島素并不是從人體內(nèi)提取的，而是借助先進的高科技生產(chǎn)技術(shù)合成的，其結(jié)構(gòu)、功能與人胰島素相似，主要的生產(chǎn)方法如下。

（1）將動物胰島素進行化學(xué)處理，而使其轉(zhuǎn)變?yōu)槿艘葝u素，如將豬胰島素B鏈30位的丙氨酸換成蘇氨酸，即為人胰島素。

（2）DNA重組技術(shù)，是一種可以無限制合成胰島素的化學(xué)過程。

具體說，就是利用一種在實驗室培養(yǎng)的特殊類型的細菌（大腸桿菌），在這種菌內(nèi)加入含有人胰島素基因的片段，通過復(fù)制、發(fā)酵等一系列化學(xué)過程，最終合成人胰島素。這是目前最常用的合成人胰島素的方法。

胰島素制劑按照其純度不同可分為標(biāo)準品及高純品。純度不同的主要指標(biāo)是胰島素原的含量。標(biāo)準品含胰島素原10～25百萬分率，高純品含胰島素原10百萬分率以下。

胰島素制劑按照作用時間不同，可分為短效、中效與長效。短效胰島素：作用高峰在注射后1～3小時，作用持續(xù)時間為5～7小時。中效胰島素：作用高峰在注射后6～10小時，作用持續(xù)時間為18～24小時。長效胰島素：作用高峰在注射后10～15小時，作用持續(xù)時間為28～36小時。

目前不同規(guī)格的胰島素在胰島素瓶的標(biāo)簽上都有明顯標(biāo)記，如：

R=正規(guī)胰島素，S=半慢胰島素，N=NpH胰島素，即中性魚精蛋白胰島素，L=慢效胰島素，U=特慢胰島素，50/50=50%NpH胰島素和50%正規(guī)胰島素的混合液，70/30=70%NpH胰島素和30%正規(guī)胰島素的混合液。正規(guī)胰島素和半慢胰島素皆屬于短效胰島素；NpH和慢效胰島素皆屬于中效胰島素；特慢胰島素是一種長效胰島素。

PZI，即魚精蛋白鋅胰島素，也是一種長效胰島素；50/50和70/30皆為中效胰島素和短效胰島素的混合物，因而在注射前無需患者再自行混合。

找個脯氨酸標(biāo)準曲線怎么這么難呢??

自己做！！

膠原海綿的羥脯氨酸含量測定

摘要：選用普通實驗室均能實現(xiàn)的Woessner第Ⅰ法對自制膠原海綿和Gelfix(國外樣品)進行了羥脯氨酸含量測定，結(jié)果表明，該方法操作簡單，重復(fù)性好：自制膠原海綿的羥脯氨酸含量穩(wěn)定，與國外樣品的羥脯氨酸含量接近，且與膠原蛋白的羥脯氨酸含量接近，證實了兩種膠原海綿的純度均較高。

關(guān)鍵詞：膠原海綿；羥脯氨酸；含量測定

膠原海綿是無過敏性、無菌凍干膠原，是促進傷口痊愈的特效藥，還可作為各種外科手術(shù)填充劑和止血藥，療效顯著，用途廣泛。羥脯氨酸是膠原的特異性氨基酸，而且含量比較穩(wěn)定，定量測定膠原水解后的羥脯氨酸含量乃是膠原定量所常用的方法〔1〕。

傳統(tǒng)測定膠原特異性氨基酸含量和膠原總量的方法是化學(xué)比色法和電泳法，其操作步驟繁瑣，影響因素多，樣品需要量大，且準確性差。氨基酸分析儀可提供快速、準確、高靈敏度的測定方法〔2〕，但氨基酸分析儀價格昂貴，普通實驗室難以實現(xiàn)。Kivirikko〔3〕等報道了一種測定尿液中羥脯氨酸的特殊方法，它適合于羥脯氨酸含量少的樣品。Woessner〔4〕等報道了適合于從組織液、動植物中提取的蛋白質(zhì)等生物材料的羥脯氨酸含量的測定方法，其中Woessner第Ⅰ法操作簡便，但易受其它氨基酸影響，僅適用于羥脯氨酸含量高的樣品測定。據(jù)報道，膠原蛋白的羥脯氨酸含量較高〔5〕，因此，本文選用Woessner第Ⅰ法對自制的膠原海綿進行了羥脯氨酸含量測定，以此作為質(zhì)量檢驗的一項重要指標(biāo)。Gelfix是歐洲科研大藥廠生產(chǎn)的膠原海綿，為了對比自制的膠原海綿與國外產(chǎn)品的純度，本文同時對Gelfix進行了羥脯氨酸含量測定。

1 材料與方法

1.1 試劑與器材

試劑：鹽酸，氯胺T，乙二醇甲醚，醋酸，氫氧化鈉，枸櫞酸鈉，醋酸鈉，過氯酸，以上均為分析純；氨基酸標(biāo)準品，生化標(biāo)準試劑；氮氣：純度為99.99%。

器材：多功能電子恒溫水浴鍋，上海凱樂電子設(shè)備廠；UV-160A紫外分光光度計，日本島津；PHS-2C酸度計，天津第二分析儀器廠；LC-222鼓風(fēng)干燥箱，溫度波動±1℃；ZFA84-Z型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海玻璃儀器廠；精密電子天平，美國Denver儀器公司；安培瓶；移液管；帶塞試管；容量瓶。

1.2 實驗方法

1.2.1 膠原海綿的制備：根據(jù)文獻〔6-7〕所述制備出可溶性膠原材料，然后將其分散在0.1%乙酸溶液中(濃度為15～25 mg/ml)，冷凍干燥制成海綿狀膠原材料。

1.2.2 Woessner第Ⅰ法

1.2.2.1 羥脯氨酸標(biāo)準液的配制：準確稱取羥脯氨酸標(biāo)準品，加入少許0.001 mol/L鹽酸溶液，配制濃度分別為1.0 μg/ml，2.0 μg/ml，3.0 μg/ml，4.0 μg/ml，5.0 μg/ml的標(biāo)準液。

1.2.2.2 樣品處理液的制備：準確稱取膠原海綿樣品約10 mg，記為W，加入6 mol/L鹽酸1 ml，于安培瓶中充氮2 min，封管后于110℃加熱24 h進行水解，水解后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器去除鹽酸，加入蒸餾水5 ml稀釋，取400 μl該溶液稀釋至10 ml，分別取0.6 ml，1 ml，2 ml該溶液用蒸餾水稀釋至4 ml作為待測樣品液，記為1#、2#、3#溶液。不取膠海綿樣品，同上加入相同試劑，以同樣的方式進行處理，配制空白液。

1.2.2.3 緩沖液的配制：枸櫞酸鈉50 g，醋酸12 ml，醋酸鈉120 g，氫氧化鈉34 g，加水至1000 ml，pH為6.0，冷藏保存。

1.2.2.4 氯胺T溶液的配制：準確稱取氯胺1.4 g T，加入蒸餾水20 ml，加入乙二醇甲醚30 ml和緩沖液50 ml，混合均勻。

1.2.2.5 過氯酸溶液的配制：70%過氯酸27 ml，加水至100 ml。

1.2.2.6 對二甲氨基苯甲醛溶液的配制：對二甲氨基苯甲醛20 g，加乙二醇甲醚溶液至總量為100 ml，冷藏保存。有結(jié)晶析出時，使用前加溫溶解。

1.2.2.7 羥脯氨酸標(biāo)準曲線的測定：以0.001 mol/L HCI作為空白液，在羥脯氨酸標(biāo)準液和空白液中分別加入氯胺T溶液2 ml，混合，室溫下靜置20 min，加入過氯酸溶液2 ml，混合，室溫下靜置5 min，加入對二甲氨基苯甲醛溶液2 ml，混合，60℃加熱20 min，置水中冷卻。以空白液作對照，測定560 nm處的吸光度。繪制出標(biāo)準曲線。

1.2.2.8 膠原海綿的羥脯氨酸含量測定：按照羥脯氨酸標(biāo)準曲線的測定方法，以空白液作為對照，測定待測樣品液的吸光度。由羥脯氨酸標(biāo)準曲線換算出樣品液的濃度C(μg/ml)，按式〔(50×C)/V×W)〕%計算出膠原海綿的羥脯氨酸含量，其中C(μg/ml)為樣品液的濃度，V分別為0.6 ml、1 ml、2 ml, W(mg)為樣品重量。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準曲線的測定

將濃度分別為1.0 μg/ml,2.0 μg/ml,3.0 μg/ml,4.0 μg/ml,5.0 μg/ml的羥脯氨酸標(biāo)準品經(jīng)氧化脫羧反應(yīng)生成吡咯，以對二甲氨基苯甲醛顯色，測定560 nm處的吸光度，結(jié)果見表1。繪制相應(yīng)的標(biāo)準曲線(見圖1)，并回歸出標(biāo)準曲線方程為：C=5.6795*ABS-0.0233。其中C為濃度(μg/ml)，ABS為吸光度。

表1 羥脯氨酸標(biāo)準品的濃度與吸光度

濃度/(μg/ml) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0

吸光度 0.176 0.370 0.534 0.703 0.883

圖1 羥脯氨酸標(biāo)準曲線

2.2 自制膠原海綿的羥脯氨酸含量測定

稱取三份自制膠原海綿樣品，每份樣品經(jīng)濃鹽酸水解后稀釋成三種濃度，分別測定其吸光度，根據(jù)羥脯氨酸的標(biāo)準曲線換算出樣品處理液的羥脯氨酸濃度，再推算出膠原海綿樣品的羥脯氨酸含量，實驗結(jié)果見表2。

表2 自制膠原海綿的羥脯氨酸含量

樣品

編號 1 2 3

1# 2# 3# 1# 2# 3# 1# 2# 3#

樣品重量/

mg 9.9 9.9 9.9 10.1 10.1 10.1 9.9 9.9 9.9

吸光度 0.205 0.342 0.679 0.215 0.356 0.699 0.210 0.344 0.669

樣品液濃度/

(μg/ml) 1.141 1.919 3.833 1.198 1.999 3.947 1.169 1.930 3.776

羥脯氨

酸含量/% 9.60 9.69 9.68 9.88 9.90 9.77 9.84 9.75 9.54

每份樣品的三種濃度的測定結(jié)果均很接近，表明Woessner第Ⅰ法測定的準確度高。三份樣品的測定結(jié)果接近，表明此方法重復(fù)性好；同時也說明自制的膠原海綿質(zhì)量穩(wěn)定。三份樣品的羥脯氨酸含量分別為9.66%、9.85%、9.71%(算術(shù)平均值)，與資料報道的膠原氨基酸總量的約10%為羥脯氨酸較接近〔1〕，表明我們自制膠原海綿的純度較高。

2.3 Gelfix的羥脯氨酸含量測定

同樣稱取三份Gelfix樣品，按同樣的方法進行羥脯氨酸含量測定，其結(jié)果見表3。

表3 Gelfix的羥脯氨酸含量

樣品

編號 1 2 3

1# 2# 3# 1# 2# 3# 1# 2# 3#

樣品重量/

mg 9.9 9.9 9.9 9.9 9.9 9.9 10.1 10.1 10.1

吸光度 0.205 0.342 0.679 0.206 0.346 0.678 0.215 0.344 0.679

樣品液濃度/

(μg/ml) 1.141 1.919 3.833 1.147 1.942 3.827 1.198 1.930 3.833

羥脯氨

酸含量/% 9.60 9.69 9.68 9.65 9.81 9.66 9.88 9.55 9.49

三份Gelfix樣品的羥脯氨酸含量分別為9.66%、9.71%、9.64%(算術(shù)平均值)，與我們自制的膠原海綿的羥脯氨酸含量接近，表明兩者的純度接近。

3 結(jié)論

3.1 Woessner第Ⅰ法操作簡單，重復(fù)性好。

3.2 自制膠原海綿的羥脯氨酸含量穩(wěn)定，表明其質(zhì)量穩(wěn)定。其羥脯氨酸含量與膠原蛋白的羥脯氨酸含量較接近，表明其純度較高。

3.3 自制膠原海綿與國外樣品的羥脯氨酸含量接近，表明兩者的純度接近。

生長激素的比活性怎么算？

生長激素中的“比活性”是活性（IU）與質(zhì)量（mg）的比值，是用來判定生長激素計量規(guī)格的屬性因素之一。比活性越高代表著生物藥品的質(zhì)量和療效就越好。

2015年藥典明確規(guī)定，生長激素比活必須用去垂體大鼠體重法和去垂體大鼠脛骨法進行測定。所以，比活是通過動物實驗測出來的，并不是按說明書計算出來的。

綜合上訴觀點，相信大部分家長已經(jīng)明白了什么是生長激素比活性，同時也用該知道了生長激素比活性數(shù)值是靠測試得到的而不是靠說明書計算得到的。所以家長們在挑選生長激素的時候不要盲目選擇比活性搞得，一定要弄清楚其中原理。實在不明白可以去醫(yī)院詢問專業(yè)醫(yī)生。金賽水劑數(shù)批次平均比活性達到了3.87，粉劑數(shù)批次平均比活性達到了3.25，20年前賽增粉劑比活性就已達到3.0，并一直被中檢所選為生長激素粉劑國家質(zhì)量標(biāo)準品。

氨基酸混合標(biāo)準品如何判斷是哪一種氨基酸？

你好，氨基酸混合樣品，通常是氨基酸溶于0.1 mol/L的HCl水溶液，如果你僅僅買了混標(biāo)，你有下列選擇：1 買一根氨基酸分析專用柱，按色譜柱廠家提供的方法(柱前衍生化方法+液相分析方法)分析，然后和色譜柱廠家的譜圖對比找峰；2 買一臺氨基酸分析以，按儀器廠家提供的方法(一般是離子交換柱分離+柱后衍生)測試，與儀器廠家的譜圖對比找峰。

生長激素費用便宜

生長激素的治療費用，本就是因人而異的，受孩子體重、年齡、骨齡等多種因素影響，不能一概而論。我們倡導(dǎo)矮小問題早發(fā)現(xiàn)早診斷早治療，治療得越早，費用會相對低一些。廣大家長在看待這個問題的時候，特別要提醒關(guān)注生長激素治療的依從性和療效，選擇更適合孩子和家庭的治療方式，堅持讓孩子用藥治療，才能追趕到理想身高。

以未發(fā)育的兒童使用短效制劑為例，治療生長激素缺乏癥兒童的給藥范圍在0.1-0.15IU/kg/d；而非生長激素缺乏引起的疾病，比如特發(fā)性矮小、小于胎齡兒、特納綜合征、慢性腎功能不全引起的矮小等，短效制劑的給藥范圍是0.15-0.2IU/kg/d。也就是說，非生長激素缺乏類病癥比生長激素缺乏癥的給藥量要大，相應(yīng)的治療費用就高一些。